簡要描述:CHO高效瞬時轉染試劑,PEI Prime是以一種陽離子高分子聚合物-聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI)為載體的基因轉染試劑。
產(chǎn)品名稱:聚乙烯亞胺PEI轉染試劑
產(chǎn)品簡介:
聚乙烯亞胺PEI轉染試劑(PEI Prime Powder, Transfection Grade Linear Polyethylenimine):PEI Prime是以一種陽離子高分子聚合物-聚乙烯亞胺(polyethylenimine,PEI)為載體的基因轉染試劑。PEI是在pH中性溶液中具有*正電荷密度的合成聚合物。帶正電的PEI與帶負電的DNA牢固結合,并賦予凈陽離子電荷,使DNA進入細胞。PEI Prime是一種高性能轉染試劑,利用PEI的特性旨在實現(xiàn)高產(chǎn)量,可重復性和可擴展的瞬時基因表達。
應用范圍:
PEI轉染試劑能夠高效率轉染多種細胞系,包括貼壁細胞和懸浮細胞。此外,PEI是用于HEK293和CHO懸浮細胞轉染的試劑。PEI轉染試劑是生產(chǎn)任何具有成本效益的生物制劑的合適選擇,包括重組蛋白,抗體和病毒。
PEI線性轉染試劑產(chǎn)品優(yōu)勢:
1. 低毒,高效
2. 操作簡單,高性價比
3. 可提供可靠、具有可重復性的轉染結果
4. 適用于快速、高通量轉染流程
轉染步驟:
-以HEK293貼壁細胞為例,步驟如下:
1. 細胞接種:細胞密度2-6 x106 cells/mL。
2. 質(zhì)粒的準備:在5%最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中,每106個細胞稀釋1.0 ug pDNA。
3. PEI的準備:在5%最終培養(yǎng)體積的DMEM或培養(yǎng)基中,每106個細胞稀釋3.0 ug PEI Prime,混勻。
4. 通過快速,短暫渦旋或顛倒數(shù)次試管,將pDNA和PEI Prime溶液混合在一起。
5. 使pDNA和PEI的混合物在室溫下靜置10分鐘。
6. 一邊旋轉板,一邊將pDNA和PEI混合物逐漸滴加到細胞中。
7. 于37℃ CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
轉染的優(yōu)化:
為達到高轉染效率和低細胞毒性的理想結果,可以進行如下優(yōu)化:
參數(shù) | 范圍 |
PEI濃度 | 3.50-6.50mg/(L final culture) |
DNA濃度 | 0.75-1.5mg/(L final culture) |
PEI/DNA混勻時間 | 5.0-15.0minutes |
與市場同類品牌的PEI轉染效率的對比:
使用PEI Prime(PEI:DNA濃度比3:1)或某國外品牌PEI,用CMV-SEAP質(zhì)粒轉染20ml 含HEK293懸浮細胞的培養(yǎng)物。 轉染后5天,使用磷酸酶報告染料和UV / Vis檢測SEAP表達水平。數(shù)據(jù)表示占某國外品牌PEI的SEAP表達水平的百分比。結果顯示我們的PEI Prime 的轉染效率比國外同類廠家高出40%。